生物实验报告

[合集]生物实验报告15篇

　　在人们素养不断提高的今天，越来越多人会去使用报告，不同的报告内容同样也是不同的。为了让您不再为写报告头疼，下面是小编收集整理的生物实验报告，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。

生物实验报告1

　　生物学是一门以实验为基础的自然科学，现代生物科学的发展尤其依赖科学实验。在生物中，实验、学习和观察等实践环节对我们掌握生物学知识、科学方法、培养我们的动手能力和形成科学素质都起到了至关重要的作用。正是因此，从我们开始接触生物这门学科开始，就不断有生物实验课程，锻炼我们各式各样的能力。

　　但是，也的确是上过各式各样的生物实验课，我才更加深刻的感受到这次做的现代生物技术综合实验对我的影响有多大。

　　老师在第一次课上，对我们详尽的讲解了我们此学期需要完成的一系列实验。其中全是环环相扣，嵌合紧密，有点一招即失，满盘皆输的压力，不过我们更多的是怀着一种跃跃欲试的激动，恨不得立马动手，靠着自己学来的知识，认真的完成这套实验，并且还能看到最终那令人欣喜的结果。就这么妄想着妄想着，我们从第二周开始的现代生物技术综合实验的漫长旅程。

　　由于，老师没有硬性的要求实验时间，我们便是一有空闲就往实验室里钻，也就少了以前实验课上出现的，因为部分实验仪器的数量缺少，同学们每次做实验都是你推我嚷的，造成了实验兴趣的流失。以至于做实验的态度越来越涣散，甚至只是简单的走下过场而已，几次实验课下来，热情全无。但按照金老师的提议来，大家来实验的时间不同，使得对仪器使用的时间错开，减少了为争抢仪器或是药品而嘈杂不堪的场面，实验也变得顺利了许多。

　　金老师会很体谅一些先开始忙活的同学，在黑板上写清他们实验大概会做到的步骤和注意事项，后面实验的准备物品和要求，然后开始在忙于实验而奔走中的同学之间晃悠。观察我们的实验操作，或是时不时提点解释一下我们实验步骤的缘由；实验药品的作用；如何做会得到更好的结果；实验没有得到好的结果或是做的失败了的原因。可是，随着实验的发展，后来更多的时候，是我们在看过书本上要求的实验步骤后，去缠着金老师，围在他周围，问他关于实验的各种问题，就算同样的问题被问过许多次，金老师依然是和蔼的笑着一一解答我们的疑问，他的平易近人，他的悉心教导，他的不骄不躁，他的耐性与笑容都深深的打动了实验中的每位同学。

　　其实，他的这种教学方式，亮点就在于此，自主实验迫使我们会仔细品味步骤中的点滴；实验过程中的出现的各种问题，就要求我们会去思考如何排除，继续实验；实验结果的不理想，更是强迫我们能认真回顾实验中的任何细节，找出问题所在，也会需要我们去深入了解这步实验的机理，用药品的理由，实验操作要求等。这些自己通过自己动手动脑而逐步累积起来的经验，是在以往任何时候都没有获得过的，那时，只知道按照老师和书本上写的步骤来，根本不在意为什么要这么做，于是少了对实验的探究，能学到的东西自然也减少。

　　说完对金老师和老师方式的看法，其次我想谈谈，我在这样的教学指导下获得的收获。

　　我是一个很懒散的人，以前做实验，大部分都是照本宣科，很少动脑筋去思考实验的前因后果，对台上老师的讲解也都是一知半解的混着。但是，这次实验着实让我很费了一番脑子，有深入的去了解个中原理，实验操作的机理，仪器的.使用方法，帮助我纠正和熟练许多操作，同时让我认识到自己以前的迷糊与不负责任，也让我体会到全身心的投入到一件事中，是如此快乐和满足，还得到了好多在课堂上永远无法获得的知识。下面，具体说说看我的几件不小的收获。

　　第一件，混实验室久了，我有了可以“变出”任何大家想要的器皿的“功能”，只要是实验室里有的且我们熟知的物品（老师打包装起来的不算），无论是药品试剂，还是不同规格的量筒试管，我都可以摸出来，省去了四处找老师寻求帮助的时间和气力。

　　第二件，学会了配置许多的试剂，于是知道了不同的试剂配置需要注意的问题，巩固了某些药品相关的知识，并且在多次配置时，得出了一个结论：如果不是很熟悉的试剂配方，最好是拿一个专门的本子记录下来，以备不时之需，这样一来，以后实验也不会因为试剂的问题而手忙脚乱。

　　第三件，实验步骤需要仔细的斟酌其中的奥秘，每一步如此走，自然有前人的用意，毕竟这些实验都是过去的科学家研究出来的精华继承，理解了他们的意图和原由，做起实验来会更加的得心应手也不易遗忘或出错。

　　第四件，这件是我最大的心得，也不全是从此次实验中得来，且也不是只能运用于做实验中，这份心得是：在决定要做的事情后，最好考虑清楚行动时会需要用些什么，做些什么，将准备工作做好，为后续行动铺垫，按其规律列好清单，会使得实验或者任何别的事情做得更加顺利，有条理，排除做过多无用功的可能性，提高了效率的同时还降低错误失误的出现概率，成功率也会增高。

　　以上是我这个学期里，从现代生物技术综合实验里得到的一些心得。我希望在下个学期里，我能将自己从这里得到的心得，学习应用到其他的实验甚至是学习生活中去，扩充自己的知识，拓宽自己的视野，增厚自己的底蕴，加强自己的能力，不敢放言称自己要成为未来生物界中的一流人才，只能勉励自己成为一个不负众望的有用的人。

生物实验报告2

　　实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布

　　实验原理：DNA绿色，RNA红色

　　分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA;RNA主要分布在细胞质中。

　　实验结果：细胞核呈绿色，细胞质呈红色。

　　实验二物质鉴定

　　还原糖+斐林试剂砖红色沉淀

　　脂肪+苏丹III橘黄色

　　脂肪+苏丹IV红色

　　蛋白质+双缩脲试剂紫色反应

　　1、还原糖的检测

　　(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。

　　(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，现配现用。

　　(3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)

　　★模拟尿糖的检测

　　1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液

　　2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸

　　3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。

　　4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。

　　2、脂肪的检测

　　(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。

　　(2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央

　　染色(滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)

　　制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)

　　镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)

　　3、蛋白质的检测

　　(1)试剂：双缩脲试剂(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液)

　　(2)步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)

　　考点提示：

　　(1)常见还原性糖与非还原性糖有哪些?

　　葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖;淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。

　　(2)还原性糖植物组织取材条件?

　　含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。

　　(3)研磨中为何要加石英砂?不加石英砂对实验有何影响?

　　加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。

　　(4)斐林试剂甲、乙两液的使用方法?混合的目的?为何要现混现用?

　　混合后使用;产生氢氧化铜;氢氧化铜不稳定。

　　(5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色

　　(6)花生种子切片为何要薄?只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。

　　(7)转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么?切片的厚薄不均匀。

　　(8)脂肪鉴定中乙醇作用?洗去浮色。

　　(9)双缩脲试剂A、B两液是否混合后用?先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化?

　　不能混合;先加A液的目的是使溶液呈碱性;先留出一些大豆组织样液做对比。

　　实验三观察叶绿体和细胞质流动

　　1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片

　　2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色，球形或椭球形。

　　用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色，细胞质接近无色。

　　知识概要：

　　取材制片低倍观察高倍观察

　　考点提示：

　　(1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶?

　　因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。

　　(2)取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉?

　　表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。

　　(3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度?最适温度是多少?进行光照、提高水温、切伤部分叶片;25℃左右。

　　(4)对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显?叶脉附近的细胞。

　　(5)若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的?仍为顺时针。

　　(6)是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动?

　　否，活细胞的细胞质都是流动的。

　　(7)若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节?

　　视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。

　　(8)在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化?叶绿体的受光面积较小有一面面向光源实验四观察有丝分裂。

　　1、材料：洋葱根尖(葱，蒜)

　　2、步骤：

　　(一)洋葱根尖的培养

　　(二)装片的制作

　　制作流程：解离→漂洗→染色→制片

　　1.解离：药液：质量分数为15%的.盐酸，体积分数为95%的酒精(1：1混合液)。时间：3~5min.目的：使组织中的细胞相互分离开来。

　　2.漂洗：用清水漂洗约10min.目的：洗去药液，防止解离过度，并有利于染色。

　　3.染色：用质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~5min。目的：使染色体着色，利于观察。

　　4.制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根尖弄碎，盖上盖玻片，在盖玻片上再加一片载玻片。然后用拇指轻轻地按压载玻片。目的：使细胞分散开来，有利于观察。

　　(三)观察

　　1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂。

　　2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。(注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点)。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。

　　考点提示：

　　(1)培养根尖时，为何要经常换水?增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。

　　(2)培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱?为什么?应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。

　　(3)为何每条根只能用根尖?取根尖的时间是何时?为何?

　　因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂;上午10时到下午2时;因为此时细胞分裂活跃。

　　(4)解离和压片的目的分别是什么?压片时为何要再加一块载玻片?解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来;再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。

　　(5)若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?压片时用力过大。

　　(6)解离过程中盐酸的作用是什么?丙酮可代替吗?分解和溶解细胞间质;不能，而硝酸可代替。

　　(7)为何要漂洗?洗去盐酸便于染色。

　　(8)细胞中染色最深的结构是什么?染色最深的结构是染色质或染色体。

　　(9)若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么?

　　染液浓度过大或染色时间过长。

　　(10)为何要找分生区?分生区的特点是什么?能用高倍物镜找分生区吗?为什么?

　　因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂;分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态;不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。

　　(11)分生区细胞中，什么时期的细胞最多?为什么?间期;因为在细胞周期中，间期时间最长。

　　(12)所观察的细胞能从中期变化到后期吗?为什么?

　　不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的死细胞。

　　(13)观察洋葱表皮细胞能否看到染色体?为什么?不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。

　　(14)若观察时不能看到染色体，其原因是什么?

　　没有找到分生区细胞;没有找到处于分裂期的细胞;染液过稀;染色时间过短。

生物实验报告3

　　实验日期： 年月 日

　　组长： 组员：

　　一、实验要求

　　1、练习使用显微镜，学习规范的操作方法。

　　2、能够独立操作显微镜。

　　3、能够将玻片标本移动到视野中央，并看到清晰的图像。

　　二、实验原理

　　三、材料用具

　　显微镜，写有“上”字的玻片，动物、植物玻片标本，擦镜纸，纱布。

　　四、方法与步骤

　　（一）取镜和安放

　　1、右手握住镜臂，左手托住镜座

　　2、把显微镜放在实验台上，略偏左。安装好目镜和物镜。

　　（二）对光

　　3、转动转换器，使低倍物镜对准通光孔（物镜的'前端与载物台要保持2厘米的距离）。

　　4、把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内（右眼睁开，便于以后同时画图）。转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜，以看到白亮的视野。

　　（三）观察

　　5、把所要观察的玻片标本（也可以用印有“e”字的薄纸片制成）放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。

　　6、转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（眼睛看着物镜，以免物镜碰到玻片标本）。

　　7、左眼向目镜内看，同时反方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。

　　注意事项：

　　1、实验完毕，把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器，把两个物镜偏到峡谷旁。最后把显微镜放进镜箱里，

生物实验报告4

　　质粒DNA的提取、纯化及检测

　　姓名：XXX学号：2011001400XX年级：20xx级生物基地班 实验日期：20xx年9月16日—30日组别：6组 同组者：XX

　　一、【实验目的】

　　1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒DNA的原理和方法。

　　2、学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理。

　　3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。

　　4、学习并掌握凝胶中DNA的分离纯化方法。

　　二、【实验原理】

　　1、质粒DNA的制备方法

　　质粒（Plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200Kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的DNA。

　　质粒DNA的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。主要方法包括：碱裂解法：0。2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒DNA。

　　2、质粒DNA的提取——碱变性提取法

　　在细菌细胞中，染色体DNA和质粒DNA均被释放出来，但是两者变性与复性所依赖的溶pH值不同。在pH值高达12。0的碱性溶液中，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性；共价闭合环状质粒DNA的大部分氢键断裂，但两条互补链不完全分离。因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。当用pH值4。6的KAc（NaAc）高盐溶液调节碱性溶液至中性时，变性的质粒DNA可恢复原来的共价闭合环状超螺旋结构而溶解于溶液中；但染色体DNA不能复性，而是与不稳定的大分子RNA、蛋白质—SDS复合物等一起形成缠连的、可见的白色絮状沉淀。这种沉淀通过离心，与复性的溶于溶液的质粒DNA分离。溶于上清液的质粒DNA，可用无水乙醇和盐溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性质类似，乙醇沉淀

　　DNA的同时，也伴随着RNA沉淀，可利用RNaseA将RNA降解。质粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒DNA。

　　3、凝胶电泳进行DNA分离纯化

　　电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定pH条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA的片段，是分子生物学的核心技术之一。

　　凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。

　　分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的DNA都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行DNA序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的DNA上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—D—吡喃半乳糖与3，6—脱水—L—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段DNA（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定DNA的相对分子质量，分离经限制酶水解的DNA的片段，进一步纯化DNA等。

　　琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品DNA分子的`大小、DNA分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。

　　三、【实验材料】

　　1、实验仪器

　　培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（Eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。

　　2、实验试剂

　　LB培养基，抗生素Ap（氨苄青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（PCI）混合液，预冷无水乙醇，TAE电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（EB），DNA相对分子质量标准物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5。2的醋酸钠。

　　四、【实验步骤】

　　1、准备实验

　　配制LB液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。

　　2、菌体培养

　　在含有Ap的LB平板上挑取一环携带有质粒pUC19的E。coli DH5单菌落，接种于20mlLB液体培养基中进行37℃振荡过夜培养，培养基中加Ap100ul

　　（100ug/ml），质粒pUC19具有Ap抗性基因，使得带有pUC19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mlLB液体培养基中，培养基中加入Ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。

　　3、质粒提取

　　（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。

　　（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液Ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。

　　（3）洗涤后每100mg菌体应加入冰预冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌体按100mg菌体处理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混匀，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使

　　溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生长。Tris—Cl溶液提供适当的pH。

　　（4） 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml（与溶液Ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液Ⅱ中的NaOH使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体DNA、质粒DNA和蛋白质变性；SDS为下一步沉淀做铺垫。

　　（5）按比例加入冰预冷的溶液Ⅲ1。5ml（与溶液Ⅰ、Ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质SDS复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因为长时间的碱性条件会打断基因组DNA，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被PDS共沉淀。同时变性的质粒DNA复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。

　　（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3MNaAc混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀。

　　（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。

　　（8）以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。

　　（9）将DNA沉淀溶于1mlTE缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个Eppendorf管中。TE是pH缓冲液，为DNA提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有EDTA是二价阳离子的螯合剂，抑制DNA酶作用。

　　4、质粒纯化

　　（1）Eppendorf管中加入RNase A（纯浓度＞50ug/ml），37℃保温0。5—1h

　　（2）将上述的溶液平均分配到2个1。5ml的微量离心管中，每管0。5ml，分别加入与溶液等体积的（500ul）Tris饱和苯酚溶液，振荡混匀，7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中。苯酚是经Tris饱和后的，显黄色。苯

　　酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。

　　（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的Eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响DNA的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。

　　（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的Eppendorf管中，得上清液400ul。

　　（5）向上清液中加入1/10体积的NaAc混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。

　　（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到DNA沉淀，为白色。

　　（7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部DNA沉淀所在面应与收集沉淀面一致。

　　（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulTE溶解于1管中。

　　5、质粒检测

　　（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×TAE电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。

　　（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×TAE 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。

　　（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。

　　（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进EB溶液中进行染色，完全浸泡约5min。

　　（5）凝胶成像仪观察。

　　五、【注意事项】

　　（1）滴加溶液II时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒DNA。

　　（2）加入溶液III后，生成了大量的絮状沉淀，溶液III中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体DNA断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。

生物实验报告5

　　一、实验目的：

　　1、学会如何使用显微镜观察细胞；

　　2、了解细胞的结构；

　　3、学会制作临时装片。

　　二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片

　　三、实验用具： 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X）

　　四、方法步骤：

　　1、制作松针的临时切片：

　　（1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。

　　（2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的.水滴上。

　　（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。

　　2、观察切片：

　　（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。

　　（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。

　　（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。

　　（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。

　　3、动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似）

　　4、 动物神经细胞永久装片的观察。

　　五、反思：

　　1、松针的叶面结构是什么样的？

　　2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？

　　3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？

　　4、如何调节焦距？

　　5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。

生物实验报告6

　　一、实验目的：

　　1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；

　　2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。

　　二、实验材料和仪器：

　　小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；

　　普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。

　　三、实验步骤：

　　(一)细胞形态观察

　　l、动物细胞的观察

　　（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。

　　（2）鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

　　2、植物细胞的观察

　　取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。

　　（二）细胞的大小和测量

　　1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的'焦平面上，再旋上目镜的上透镜。

　　2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。

　　3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。

　　4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：

　　镜台测微尺的格数

　　目镜测微尺每格的微米数=————————— × 10

　　目镜测微尺的格数

　　四、实验结果：

　　1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24

　　2、细胞大小的测量：

　　五、作业与思考：

　　1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。

　　白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。 白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。

　　2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。

　　3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。

生物实验报告7

　　实验五比较酶和Fe3+的催化效率

　　考点提示：

　　(1)为何要选新鲜的肝脏?因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。

　　(2)该实验中所用试管应选较粗的还是较细的?为什么?应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。

　　(3)为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗?因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富;其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。

　　(4)相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好?为什么?研磨液效果好;因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。

　　(5)滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管?为什么?不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。

　　实验六色素的提取和分离

　　1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素

　　各色素在层析液中的溶解度不同，随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素

　　2、步骤：

　　(1)提取色素研磨

　　(2)制备滤纸条

　　(3)画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次

　　(4)分离色素：不能让滤液细线触及层析液

　　(5)观察和记录：结果滤纸条上从上到下依次为：橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b)。

　　考点提示：

　　(1)对叶片的要求?为何要去掉叶柄和粗的时脉?绿色、是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。

　　(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅对实验有何影响?

　　为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。

　　(3)丙酮的作用?它可用什么来替代?用水能替代吗?

　　溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。

　　(4)碳酸钙的作用?不加碳酸钙对实验有何影响?

　　保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。

　　(5)研磨为何要迅速?要充分?过滤时为何用布不用滤纸?研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发;只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。

　　(6)滤纸条为何要剪去两角?防止两侧层析液扩散过快。

　　(7)为何不能用钢笔或圆珠笔画线?因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。

　　(8)滤液细线为何要直?为何要重画几次?防止色素带的重叠;增加色素量，使色素带的颜色更深一些。

　　(9)滤液细线为何不能触到层析液?防止色素溶解到层析液中。

　　(10)滤纸条上色素为何会分离?

　　由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的'扩散速度就不同。

　　(11)色素带最宽的是什么色素?它在层析液中的溶解度比什么色素大一些?

　　最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。

　　(12)滤纸条上相互间距的是哪两种色素?胡萝卜素和叶黄素。

　　(13)色素带最窄的是第几条色素带?为何?

　　第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。

　　实验七观察质壁分离和复原

　　1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡

　　2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞(具紫色大液泡)，质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。

　　3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液，另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小，颜色由浅变深，原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水，另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原)

　　4、结论：细胞外溶液浓度>细胞内溶液浓度，细胞失水质壁分离

　　细胞外溶液浓度<细胞内溶液浓度，细胞吸水质壁分离复原

　　知识概要：制片观察加液观察加水观察

　　考点提示：

　　(1)洋葱为何要选紫色的?若紫色过淡怎么办?

　　紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化;缩小光圈，使视野变暗些。

　　(2)洋葱表皮应撕还是削?为何?表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。

　　(3)植物细胞为何会出现质壁分离?动物细胞会吗?当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性;动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。

　　(4)质壁分离时，液泡大小和颜色的变化?复原时呢?

　　细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深;当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。

　　(5)若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么?

　　细胞已经死亡(可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长)

　　(6)高倍镜使用前，装片如何移动?

　　若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野中看到的是倒像。

　　(7)换高倍物镜后，怎样使物像清晰?视野明暗度会怎样变化?如何调亮?换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰;视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。

　　(8)所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系?目镜越长，放大倍数越小;物镜越长，放大倍数越大。

　　(9)物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系?

　　物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。

　　(10)总放大倍数的计算方法?放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数?

　　总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积;放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。

　　(11)放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系?

　　放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。

　　(12)更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上;更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。

　　(13)怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度?①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。

生物实验报告8

　　一、实验目的：

　　1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。

　　2、了解细胞凋亡的生物学意义

　　3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法

　　二、实验原理：

　　1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的`有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。

　　2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。

　　3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。

　　三、实验步骤：

　　细胞中过氧化物酶的显示

　　1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；

　　2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；

　　3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；

　　4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。

　　5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）

　　6、清水冲洗，番红复染2min。

　　7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100×）

　　细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)

　　2、生理盐水轻轻漂洗细胞

　　3、95%乙醇固定5min

　　4、PBS缓冲液洗2次

　　5、吉姆萨染色液染色5min

　　6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　7、普通光学显微镜下观察。

　　吖啶橙染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)

　　2、生理盐水轻轻漂洗细胞

　　3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min

　　4、PBS缓冲液洗2次每次1min

　　5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。

　　四、结果与分析：

　　根据随机选择的几个视野的统计，该样品的细胞凋亡率=227/506×100=44.9

　　Hela细胞凋亡过程中核染色质的形态变化（吖啶橙染色）

　　五、思考题：

　　1、细胞凋亡的调控机制

　　细胞凋亡是一个受基因调控、众多细胞膜受体和胞浆蛋白参与的细胞主动自杀过程，其触发因素多种多样，包括细胞内诱导因子和抑制因子对细胞凋亡的调控。

　　2、细胞凋亡的特征

　　凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体。

　　3、研究细胞凋亡的方法

　　定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）

　　定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。

生物实验报告9

　　实验生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定

　　一、实验目的

　　初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

　　二、实验原理

　　1．还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。

　　斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：

　　CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O

　　用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。

　　2．蛋白质的鉴定原理鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01 g／mL(B)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的'肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

　　3．脂肪的鉴定原理脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色，被苏丹Ⅳ 染成红色

　　三、实验过程（见书Ｐ18）

　　四、实验用品（见书Ｐ18）

　　五、注意

　　1.关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

　　2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

　　3．蛋白质的鉴定中先加双缩脲A，再加双缩脲B

　　六、讨论

　　鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

生物实验报告10

　　实验教师：xxx

　　所在学校：xxx中学

　　目的要求：

　　1练习徒手切片

　　2认识叶片的结构

　　3画叶片的表皮细胞和保卫细胞

　　材料用具：

　　新鲜叶片（如菠菜、槐树、蚕豆的叶片），显微镜，双面刀片（两片、并在一起、一侧用胶布粘牢）、镊子、载玻片、盖玻片、叶片的永久切片、盛有清水的培养皿、滴管、吸水纸、碘液、纱布、毛笔、小木板。

　　方法步骤

　　方法与步骤要点

　　注意事项

　　（一）练习徒手切片，制作叶片横切片的临时切片

　　1将新鲜的叶片平放在小木板上。

　　2右手捏紧并排的两片刀片，沿着图中虚线的方向，迅速切割。

　　3把刀片夹缝中存在的切下的薄片放入盛有清水培养皿中。要多切几次（每切一次，刀片要蘸一下水）。

　　4用毛笔蘸出最薄的一片，制成临时切片。叶片下面要垫上小块木板，以防损坏桌面。刀片要捏紧，切割速度要快，注意安全。

　　为了便于观察，载玻片的水滴中可以同时放几片叶的横切片，选择切得最薄的一片用来观察。

　　（二）观察叶片的`结构

　　1．用显微镜先观察叶片横切面的临时切片，再观察叶片的永久横切片。

　　2．观察时注意分清时的表皮、叶肉和叶脉。

　　仔细观察上、下表皮细胞的区别

　　（三）观察叶片的下表皮

　　1．用镊子撕下一小块叶片的下表皮，制成临时装片。

　　2．用显微镜进行观察，下表皮细胞的形态是什么样子的，下表皮上有没有气孔？

　　撕取下表皮时，一定要薄，否则影响观察效果。

　　注意观察气孔的结构。

　　（四）画图

　　在下面空白处画出下表皮上一对保卫细胞及周围的几个表皮细胞，这一对保卫细胞要详细画，周围的细胞只需勾出轮廓。

　　画图时，要真实、实事求是。

　　讨论与交流

　　1．保卫细胞的结构特点对植物的蒸腾作用有什么意义？

　　2．从结构上看，叶片有哪些方面是适于接受阳光的？

生物实验报告11

　　实验目的

　　⒈学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

　　⒉了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。

　　⒊学习细胞计数及营养液的配制。

　　实验原理

　　⒈细胞原代培养

　　原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。

　　细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。

　　⒉细胞死活鉴定死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。

　　染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。

　　死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括：

　　☆死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。

　　☆死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的'无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。

　　除此之外，还有一些细胞器的专有染料。如液泡系的专有染料中性红。中性红是一种低毒性染料，可以使活细胞液泡着红色，而细胞质和细胞核不被着色；死细胞的液泡不被着色或浅染，染料弥散于整个细胞中，细胞核和细胞质被染成红色。有时侯为了增加染色效果可以将两种染料结合使用，如甲基蓝-中性红混合染色法。

　　实验用品

　　⒈材料小白鼠

　　⒉试剂

　　台盼蓝、伊红、PBS缓冲液、细胞培养液（含生长因子）

　　⒊器材

　　剪子、棉球、75%酒精、移液枪、无菌操作台、正置光学显微镜、倒置光学显微镜、解剖盘、滴管、离心管、离心机、注射器、Eppendorf管、培养皿、酒精灯、塑料培养皿、载玻片、盖玻片、血细胞计数板

　　实验步骤

　　⒈取材

　　取小鼠一只，采用断头法处死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min，取出转入超净工作台内的解剖盘中，无菌操作打开腹腔，取出其脾脏，除去其周围的脂肪组织，并用PBS液自上而下淋洗1-2次，转入无菌培养皿中待用。

　　⒉分离脾细胞

　　用滴管向培养皿中注入30滴PBS缓冲液，再用“L”型针头注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾脏，注射时沿长轴注射。然后再用针头在脾脏上扎眼，并用“L”型针头轻轻刮出脾细胞。在均匀吹匀脾脏细胞。

　　吸取上述分离的单个脾细胞悬液，放入Eppendorf管中，使量至1mL，以1000r/min离心5min。⒊培养脾细胞

　　取塑料培养皿一套，用移液枪吸取培养液2mL加入塑料皿中，并将皿标记待用。取离心后的Eppendorf管，弃去上清液，用移液枪（200ul）吸取塑料皿中的培养液400ul加入弃去上清的Eppendorf管中，用枪头吹匀管底的脾细胞，吸取200ul脾细胞悬液接种于上述塑料皿中，混匀后放入37°C，5%CO2的培养箱中培养。

　　⒋配制染液

　　用生理盐水配成5%台盼蓝染液，备用。⒌染色

　　取0.5mL细胞悬浊液放入试管中，加入1-2滴染液。混合。2-5min后将细胞放在血细胞计数板上观察死活情况，注意不要有

　　气泡产生，放大倍数为10x10。染色后活细胞不着色，死细胞显示蓝色。注意染色时间不能超过15min，否则染液将细胞毒杀。

　　⒍计数

　　在10x10倍的显微镜下观察，计算血细胞计数板的4个4小方格的细胞数量。包括细胞总数与死细胞数量。压线者计上不计下，计左不计右。

　　⒎计算细胞活力

　　根据公式：细胞活力=(总细胞数-死细胞数)/总细胞数×100%

　　实验结果

　　台盼蓝染色后的细胞（10x10）伊红染色后的细胞（10x10）

　　总细胞数和活细胞数统计表（10×10）

　　项目自己培养细胞老师培养细胞总细胞数个/ml活细胞数个/ml细胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%分析与讨论

　　⒈结果分析

　　本次实验中我们小组自己培养细胞所测细胞活力为21.4%，并不算高，分析得应有以下原因可能影响实验结果（包括误差）：

　　⑴若在无菌操作的过程中操作不规范，导致染菌，会极大的影响观察，导致实验失败。

　　⑵若在离心分离呈单细胞的过程中离心机转速过快或时间过长很可能会导致细胞破裂，导致小鼠脾细胞大量死亡。

　　⑶染色时间过长，或观察时间过长都会导致染色试剂将细胞杀死，使细胞活力骤降，这是导致细胞活力比较低的重要原因。

　　⑷实验中的一些操作不正确或不规范的情况、计算带来的误差等也会直接导致实验误差。

　　⒉注意事项

　　⑴严格进行动物消毒，需用75%酒精消毒。

　　⑵严格进行无菌操作，防止细菌、霉菌、支原体污染，避免化学物质污染。

　　⑶吸取液体前，瓶口和吸管硬行火焰消毒；吸取液体时，避免碰撞。

　　⑷离心管入台前，管口、管壁应消毒。

　　⑸实验者离开超净台时，要随时用肘部关闭工作窗。

　　⑹器材使用时既要注意用火焰消毒，又要防止烫伤、烫死细胞。

生物实验报告12

　　一、实验目的初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。

　　二、实验原理

　　1．还原糖的鉴定原理

　　生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为0.1g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。

　　2．蛋白质的鉴定原理

　　鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g／mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01g／mL(B)的`硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。

　　3．脂肪的鉴定原理

　　脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色，被苏丹Ⅳ染成红色

　　三、实验过程（见书Ｐ18）

　　四、实验用品（见书Ｐ18）

　　五、注意

　　关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。

　　2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。

　　3．蛋白质的鉴定中先加双缩脲A，再加双缩脲B六、讨论鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的根据是什么？

生物实验报告13

　　一、实验目的

　　（一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一

　　般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。

　　（二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰

　　氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。

　　（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。

　　二、实验用品

　　（一）器材

　　量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜

　　（二）试剂及材料

　　肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏

　　三、实验步骤

　　（一）培养基的制备

　　（所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内）

　　1、麦康凯培养基

　　（1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖

　　10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml

　　（2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节

　　ph至7.2。将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。将两

　　液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌

　　15~30min。待冷却至50~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后

　　倾注平板。

　　注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。

　　2、血清平板

　　（1）组成：营养琼脂、牛血清

　　（2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并

　　混匀，倾注平板。

　　注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。

　　3、lb培养基

　　（1）组成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g

　　（2）方法：在950ml蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化钠，调节ph至7.4，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。待冷却至50~ 55℃时，倾注平板。

　　4、液体培养基（在lb培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分装）

　　（二）病料取材

　　在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完整性，用储物袋密封保存。

　　（三）细菌粗培养

　　1、消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。

　　2、接种

　　（1）在无菌操作台酒精灯旁打开用储物袋密封保存的病料，先左手持镊子右

　　手持剪刀，把病料剪出一个小口。

　　（2）右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将平皿揭

　　开约20左右，然后将接种环前端插入小口旋转一下后，再用划线接种的方法接种到一个血清平板上。

　　（3）用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、部位等标记，并将平板倒放。

　　以此方法，分别接种十二指肠、胃粘膜、肝脏于血清平板上，各接种2个血清平板。

　　3、培养：将接种好的血清平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。注：划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落，且划线时接种环应尽量倾斜，以免划破培养基（后同）；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。 。

　　（四）细菌纯培养

　　1、菌落特征判断

　　待粗培养的细菌培养24小时后，取出用放大镜观察记录单个小菌落的形态特征并用实验报告纸记录好，并在平板底部上做好观察标记，其形态特征包括大小、形状、菌落边缘、表面构造、隆起度、湿润度、透明度、颜色等。

　　2、取单个菌落进行革兰氏染色镜检

　　（1）取干净的载玻片，用记号笔在其一面做好正反面标记，再在载玻片另一

　　面中央滴上一小滴蒸馏水。

　　（2）将接种环在火焰上灭菌，待冷却后，在酒精灯旁从标记的单个小菌落中

　　取少许细菌置于蒸馏水中混匀（同时盖好平板倒扣置于一旁），用接种环涂成直径约1.5cm的菌膜，再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌，待冷却进行染色。

　　（3）先滴加草酸结晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革兰氏碘液溶液

　　染色1~2min，再水洗；随后滴加95%的酒精脱色30~60s，再水洗；最后滴加稀释的品红进行复染30~60s，再水洗；待干燥或吸水纸吸干后镜检。

　　（4）将干燥的载玻片放在1000倍油镜下，滴加一滴松柏油进行镜检，观察其

　　形态特征，判断细菌的'种属。

　　3、细菌接种培养

　　（1）消毒灭菌：操作人员先用消毒水清洗手或戴好实验手套，再用消毒水对

　　无菌操作台内桌面及用酒精灯外焰对待用器械进行火焰灭菌。

　　（2）接种：右手持灭过菌的接种环，左手持平板，并用拇指、食指及中指将

　　平皿揭开约20左右，然后将接种环插入揭开的平板口内蘸去一下镜检标记的小菌落，再用划线接种的方法接种到一个血清平板、lb平板或麦康凯平板上。并用记号笔在平板底部作好日期、操作人员、菌种、部位等标记，将平板倒放。

　　（3）将接种好的平板倒扣放入37℃培养箱中，反向培养24小时。

　　注：油镜用完后应立即清理物镜上的松柏油；划线接种时尽量划开，以保证长出单个菌落；待接种完毕后熄灭无菌操作台内酒精灯，关闭好无菌操作台窗口，打开无菌操作台内的紫外灯。 。

　　（五）菌液的制备

　　1、镜检：用革兰氏染色法在1000倍油镜下镜检，观察并记录是否为纯培养的细菌。

　　2、分装液体培养基：先对无菌操作台及需要使用的器械进行消毒灭菌，然后用钳子揭开一个空试剂瓶，用倾倒的方法在酒精灯旁从液体培养基大试剂瓶中分装于空试剂瓶内，并立即盖上液体培养基大试剂瓶瓶塞。

　　3、接种：右手持接种环，用火焰对其进行灭菌，待冷却后，取出纯培养的平板，在无菌操作台内酒精灯旁，蘸去少许细菌，左手倾斜液体培养基，将接种环，伸入液体培养基内搅动，然后取出对接种火焰环灭菌，并用灭菌的包装纸捆绑好后，用记号笔做好相应标记，置于一旁。

　　4、培养摇菌：将接种好的液体培养基置于水浴培养箱中培养24小时。注：分装一个培养基就接种一个培养基，不得全部分装完后再一个一个接种。

　　（六）小鼠致病性实验

　　1、保定：选择健康的青壮年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋转数周让其眩晕，然后用左手的拇指和食指捏住两耳及头部皮肤，并翻转左手，使其头部朝下，以达到内脏前移的目的。

　　2、接种：先用酒精棉球蘸取酒精对注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。

　　3、观察：将接种的小白鼠放在适宜的环境下生活，并在鼠笼处用记号笔标记好接种时间、菌种等。

　　4、再培养鉴定：待小白鼠死亡后，对其进行解剖，观察其内脏病变情况，并取肝脏直接涂在相应培养基上，在适宜条件下反向培养24小时后，取菌落细菌进行镜检观察判断。

　　注：在注射小白鼠2小时候需要观察小白鼠是否因注射时伤害到内脏而死亡。

生物实验报告14

　　一、实验目的

　　1. 学会提取和分离叶绿体中色素的方法。

　　2. 比较、观察叶绿体中四种色素：理解它们的特点及与光合作用的关系

　　二、实验原理

　　光合色素主要存在于高等植物叶绿体的基粒片层上，而叶绿体中的色素能溶于有机溶剂

　　中。故要提取色素，要破坏细胞结构，破坏叶绿体膜，使基粒片层结构直接与有机溶剂接

　　触，使色素溶解在有机溶剂中。

　　叶绿体中的'色素有四种，不同色素在层析液(脂溶性强的有机溶剂)中的溶解度不同，

　　因而随层析液的扩散速度也不同。

　　三、材料用具

　　取新鲜的绿色叶片、定性滤纸、烧杯、研钵、漏斗、纱布、剪刀、小试管、培养皿、毛细吸管、量筒、有机溶剂、层析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸钙。

　　四、实验过程（见书Ｐ54）

　　1.提取色素：

　　2.制备滤纸条：

　　3.色素分离，纸层析法。（不要让滤液细线触及层析液）

　　4.观察：

　　层析后，取出滤纸，在通风处吹干。观察滤纸条上出现色素带的数目、颜色、位置和宽窄。结果是：4条色素带从上而下依次是：胡萝卜素(橙黄色)、叶黄素(黄色)、叶绿素a(蓝绿色)、叶绿素b(黄绿色)。

　　五、讨论

　　1.滤纸条上的滤液细线为什么不能接触到层析液？

　　2．提取和分离叶绿体中色素的关键是什么？

生物实验报告15

　　一、实验目的

　　1、观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。

　　2、初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技能。

　　3、初步掌握绘制生物图的方法。

　　二、实验原理

　　在植物体中，有丝分裂常见于根尖、茎尖等分生区细胞，高等植物细胞有丝分裂的.过

　　程，分为分裂间期和分裂期的前期、中期、后期、末期。可以用高倍显微镜观察植物细胞的

　　有丝分裂的过程，根据各个时期细胞内染色体（或染色质）的变化情况，识别该细胞处于有

　　丝分裂的哪个时期，细胞核内的染色体容易被碱性染料着色。

　　三、材料用具

　　洋葱根尖、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、培养皿、铅笔、质量分数为15%的盐酸、

　　体积分数为95%的酒精、质量分数为0.01g/ml的龙胆紫（或紫药水）

　　四、实验过程（见书Ｐ39）

　　1、洋葱根尖的培养（提前3—4天）

　　2、解离：5min

　　3、漂洗：10min

　　4、染色：5min

　　5、制片

　　6、镜检

　　五、注意

　　1、解离充分是实验成功的必备条件。解离充分，组织才能分散，细胞也不会重叠。

　　2、漂洗时间一定要足够，否则细胞染不上色。

　　3、染色时，染液的浓度和染色时间必须掌握好。特别是染色不能过深，否则镜下一片紫色，无法观察。

　　六、讨论

　　1、制作好洋葱根尖有丝分裂装片的关键是什么？谈谈你自己的体会。

　　2、在观察清楚有丝分裂各个时期的细胞以后，绘出洋葱根尖细胞有丝分裂的简图，并标明时期。

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